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发现问题我公司某项目在采用waters液相进行方法转移时发现空白溶剂（流动相A）在3.5min有出峰，干扰杂质B的灵敏度测定，空白溶剂谱图如下：

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【资料图】

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问题排查思路

方法开发方是否也存在同样的问题

方法开发方采用的是Agilent液相进行的方法开发及验证，空白溶剂(流动相A)在杂质B出峰位置无干扰，空白溶剂谱图如下： 方法开发方采用waters液相重新方法，存在同样的问题，空白溶剂(流动相A)在杂质B出锋位置也有干扰，空白溶剂谱图如下：

是否是缓冲盐或溶剂引入的干扰

本方法色谱条件为流动相A：磷酸二氢铵溶液（取磷酸二氢铵11.5g，加水1000ml溶解，并用磷酸调pH值至4.4）流动相B为乙腈-流动相A（1:1）柱温为40℃；检测波长为230nm；进样体积为10μl，梯度洗脱程序如下表所示：

是否是“溶剂效应”导致不同品牌液相色谱行为的差异

更换磷酸二氢铵为SIGMA厂家HPLC级别的盐并安装新鬼锋捕集小柱，稀释剂（流动相A）谱图未见改善，仍有干扰峰出现，谱图如下： 更换稀释剂（流动相A）为稀释剂（流动相A：流动相B 82:18，v/v），采用waters液相，稀释剂干扰峰消失，谱图如下：

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现象分析在日常检测中，稀释剂干扰是一个很让人头痛的问题，其本质是稀释剂中不可避免也可能含有光谱响应的物质，通常这样杂质保留较弱，容易产生“溶剂效应”，解决该问题最好的方式就是采用初始比例的流动相作为稀释剂。我们在进行分析方法开发中首先应考虑流动相作为稀释剂，如遇到溶解性、溶液稳定性等问题，可以适当在稀释剂中增加助溶剂，稳定剂等，但要做充分的耐受性考察，如更换不同品牌的液相等，以确保检测数据的准确性和可重现性。

参考文献

[1]液相色谱柱与方法开发指南 [2] 实用高效液相色谱法建立。

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撰稿人 |雨化田

责任编辑 | 许飞

审核人 | 何发

标签： 溶剂效应 液相色谱